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猪ELISA试剂盒试验注意事项有哪些?

2019-02-27 [1176]

 一年有四个时节,每个时节都有不同的风光,而我喜欢冬天下雪时的艳丽风光。冬天,大雪纷飞人们好象来到了一个幽雅安静的jing界,来到了一个晶莹透剔的童话般的世界。松的那清 香,白雪的那冰香,给人一种凉莹莹的劝慰。一切都在过滤,一切都在前进,连我的心灵也在净化,变得纯真而又夸姣。 
在ELISA实验前的留神事项 

 1、仔细阅读说明书

 2、断定试剂盒在有效期内 

 3、按说明书断定一切试剂*(数量、体积) 

 4、标本制备要标准,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,留神低温保存 

 5、准备好一切实验额外所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等

 6、根据检测标本数量断定所需试剂的量 

 7、按说明书将所用试剂平衡至室温,制造所需试剂 
 ELISA实验时,留神事项如下: 

1.正式实验时,应分别以阳性对照与阴性对照操控实验条件,待检样品应作一式二份,以确保实验效果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可选用羊血清、兔血清或BSA等关闭。 2.在ELISA中,进行各项实验条件的挑选是很重要的,其间包含: 

(1)固相载体的挑选:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载 体,在运用前均可进行挑选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,查询其显色反应是否均一性,据此判明其吸附功用是否出色。 

(2)包被抗体(或抗原)的挑选:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时刻及其蛋白量也有必定影响,一般多选用4℃18 ~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它实验条件相一起,查询阳性标本的OD值。挑选OD值大而蛋白量少的 浓度。关于大都蛋白质来说一般为1~10μg/ml。

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