操作ELISA时需要留意这几点

1. 正式试验时，ELISA试剂盒应分别以阳性对照与阴性对照操控试验条件，待检样品应作一式二份，以确保试验结果的性。有时本底较高，阐明有非特异性反响，可采用羊血清、兔血清或BSA等关闭。
2. 在ELISA中，进行各项试验条件的挑选是很重要的，其间包括：
① 固相载体的挑选：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不论何种载体，在运用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一试验条件下进行反响，观察其显色反响是否均一性，据此判明其吸附功能是否杰出。
 ② 包被抗体(或抗原)的挑选：将抗体(或抗原)吸附在固相载体外表时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时刻及其蛋白量也有必定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg／ml等)进行包被后，在其它试验条件相一起，观察阳性标本的OD值。ELISA试剂盒挑选OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。关于多数蛋白质来说一般为1～10μg／ml。
③ 酶标记抗体作业浓度的挑选：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参阅品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式试验体系里地滴定其作业浓度。
 ④ 酶的底物及供氢体的挑选：对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反响，而自身无色。有些供氢体有潜在的致癌效果，ELISA试剂盒应留意防护。有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是现在较为满意的供氢体。底物效果一段时刻后，应加入强酸或强碱以停止反响。一般底物效果时刻，以10-30分钟为宜。底物运用液有必要新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。
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