研域上海生物为您分享细胞技术分析

细胞技术作为一项生命科学领域的重要技术，想要使用好自然是不容易。相信不少小伙伴在使用几次之后，还是会有云里雾里的感觉。真正想掌握好一门技术，还是得从基础部分就做好。

1.如何搭配流式抗体荧光标记？

流式抗体荧光标记搭配主要由3个因素决定：流式细胞仪能检测多少个通道、需要同时检测多少个指标、厂家的抗体有多少种荧光标记。流式细胞仪的通道越多，那么同一份样本能同时检测的表面/胞内/核内蛋白就越多。以Calibur为例说明：Calibur的FL1通道选择了FITC就不能选择AlexaFluro488，或者选择了Alexa Fluro488就不能选FITC；Calibur的FL3通道尽管能检测PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCP-Cy5.5, PE-Cy7五个荧光素，但是我们搭配的时候只能选择其中1个。

2.如果检测的指标数目超过了流式细胞仪的通道，怎么办？

如果需要做5个指标，而流式细胞仪只能做4个通道，首先将指标归成2类，再将样本分成2份，分别检测。比如需要同时检测CD3、CD4、CD8、IL-4和IFN-gamma，可以将样本分成两份，第1份加CD3、CD4、CD8 和IL-4，而第2份加CD3、CD4、CD8和IFN-gamma。具体的归类方式可根据课题的设计来进行。

3.抗体染色的细胞不能立即检测该如何处理？

如果实验对细胞活性要求比较高，如凋亡实验，必须尽快检测；如果实验对细胞活性要求不高，可以使用含有4%多聚甲醛的PBS固定样本30分钟，固定后的细胞4℃过夜保存，次日检测。

4.同型对照的作用是什么？

抗体有时会和非抗原结合，可能会因为非特异的蛋白-蛋白相互作用结合细胞内成分，因为疏水作用结合脂肪，也可能会结合一些细胞表面表达的抗体受体。比如，IgG亚型的抗体会结合细胞表面的Fc受体，如CD16、CD32和CD64。理想条件下，各种类型的非特异性结合都可以通过蛋白（BSA、牛奶或动物血清）来阻断。Fc受体的结合则可以通过与含免疫球蛋白的血清预孵育来阻断。一个抗体非特异性相互作用和受体结合的情况，可以用无关抗原的相同亚型抗体来比照。