细胞培养基技术说明

       在医学遗传学研究中应用广泛的是外周血淋巴细胞、皮肤或纤维细胞和各种能在体外长期生长的细胞系。外周血淋巴细胞培养基具有时间短、技术简便、可重复取材等优点，它在临床染色体分析中使用广泛。体外培养细胞培养基株可在培养过程中发生自发的或在外界作用下的转化，成为细胞系，也可直接建成细胞系，细胞培养基系能在体外无取制的传代和生长。细胞系通常具有非整倍体细胞和各个细胞的核型不相同特征。但细胞克隆的细胞系其这一特征可以不明显。

细胞在体外培养中所需的条件与体内细胞基本相同。

1、无污染环境

       培养环境无毒和无菌是保证细胞培养基生存的首要条件。当细胞放置于体外培养时，与体内相比细胞丢失了对微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代谢物质积累等，可导致细胞培养基死亡。因此在进行培养中，保持细胞生存环境无污染、代谢物及时清除等，是维持细胞生存的基本条件。

2、恒定的温度

　　维持培养细胞培养基旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃，偏离这一温度范围，细胞培养基的正常代谢会受到影响，甚至死亡。培养细胞对低温的耐受力较对高温强，温度上升不超过39℃时，细胞代谢与温度成正比；人体细胞在39-40℃1小时，即能受到一定损伤，但仍有可能恢复；在40-41℃1小时，细胞会普遍受到损伤，仅小半数有可能恢复；41-42℃1小时，细胞培养基受到严重损伤，大部分细胞培养基死亡，个别细胞仍有恢复可能；当温度在43℃以上1小时，细胞培养基全部死亡。

3、气体环境

　　气体是人体细胞培养基生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三羧酸循环，产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中。

　　二氧化碳既是细胞培养基代谢产物，也是细胞培养基生长繁殖所需成分，它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的PH值。大多数细胞的适宜PH为7.2-7.4，偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响。但细胞耐酸性比耐碱性大一些，在偏酸环境中更利于细胞生长。有资料显示，原代羊水细胞培养PH6.8时zui适。

　　细胞培养基液PH浓度的调节常用的为加NaHCO3的方法，因为NaHCO3可供CO2，但二氧易于逸出，故适用于封闭培养，也起缓冲作用，有防止PH迅速变动的特性而用于开放细胞培养技术中，其zui大优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的PH值。