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ELISA试剂盒实验重复性差的原因分析及解决方法

2013-11-15 [2474]

1、ELISA试剂盒样品数量不一,加样时间长短不一;
重复某一样品时,加样时间尽可能与*次接近。
2、样品加入后未混匀;
加样后在混匀器上充分混匀。
3、酶标仪滤光片不对或输入波长不对;
TMB显色用450/630波长.
4、酶标仪测定重复性差;
校对酶标仪。
5、洗涤不正确;
洗涤液注满各孔但不要溢出。洗板时反应板面向下,垂直用力甩净内容物(可多甩几次),在干净、无或少尘的吸水材料上拍干。洗板机洗板时不应有堵孔,洗涤应充分。
6、温育条件不一致(一次用水育,一次用恒温箱)
恒温箱温育较水浴显色深, OD值高出0.1-0.15,均采用恒温箱.如用水浴水温应控制在37℃。
7、不慎多加或少加酶或显色剂;
多加时显色深,少加则浅,用记号笔圈上,便于分析。
8、阈值附近时阴时阳;
同一样品做三个复孔,以二个(含二个以上相同结果为准)
9、ELISA试剂盒实验加样量不足、保温时间、洗涤条件一致;

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