犬B细胞淋巴瘤因子试剂盒

犬B细胞淋巴瘤因子试剂盒
该试剂盒以 HRP标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、特异性强、定性定位    、背景清晰。在所用的B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)一抗与相应靶抗原抗原。该试剂盒，用生物化二抗与一抗特异性，zui后加 HRP-SA，形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA复合物，显微镜下观察成像。 
试剂盒所含试剂：
试剂A 通透液：0.1% Triton-X 100   10 mL（选用） 
试剂B 2瓶封闭
试剂C （*分装）已稀释的即用型bcl-2一抗（2.5ml） 
试剂D （*分装）生物素化       IgG 1支 
（浓度1.5 mg/mL，稀释     1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液20ml 
（封闭用） 10ml/瓶 
试剂E  HRP-SA复合物1支（浓度1 μM，稀释     1:50~1:200）100 μL 
试剂F  DAB显色液 5ml 
用户自备试剂：
1． 10mM TBS（pH7.2~7.4） 
三犬B细胞淋巴瘤因子试剂盒

加蒸馏  800mL，浓盐酸调pH值至7.2~7.4，zui后定容至1000mL TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积） 
2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液） 
10mM pH6.0 柠檬酸
柠檬酸0.38g 
柠檬酸三钠2.45g 
加蒸馏  900mL，浓盐酸调pH值至6.0，zui后定容至1000mL 
或：0.5M EDTA修复液（pH8.0） 
EDTA·2H2O 186.1g 
柠檬酸三钠2.45g 
加蒸馏  700mL，用10mM NaOH调pH值至8.0，zui后定容至1000Ml . 
10 mL 
4. Tween 20 5 mL 
石蜡包埋组织切片
实验步骤（建议方案）：
石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度 
1.烤片： 将待做切片，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr； 3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
2.脱蜡： 切片放10 min； 
3.    ： 切片经下行酒精    ，无乙醇2 min；75%乙醇2min，自来5min，95%乙醇2次（每次2min），85%，ddH2O洗2×2min； 
4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然    ，自来2min，TBS洗涤（2×2min）（5步封闭。 
5.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育30 min； ，ddH2O洗2×1）* 注：有些抗原勿需修复，
直接进
6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃夜； 
7.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min）； 
8.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育10 min； 
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育30 min； 
10.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min）； 
11.封闭： 滴加试剂Tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min； 
12.加HRP-SA： 滴加用试剂C稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20 nM），37℃湿盒中孵育30 min； 
13.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min），TBS洗涤（2×5 min）； 
14.显色：应用DAB溶液（试剂F）显色； 
15.复染：自来，复染，脱  ，透明； 
16.封片： 待组织标本干后，用试剂
17.观察成像： 显微镜下观察成像。 封片； 

注意事项：犬B细胞淋巴瘤因子试剂盒
1. 修复后，自来，骤。 

2. ，用过的柠檬酸用。 
3. 若试剂为微量浓    ，用前应低速离心，将。
4. 封片前一定要换用TBS ，以便洗去组织上残留的Tween 20，否则会影响。 
5. 如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。 
附1：
抗原修复方法
常用抗原修复液：柠檬酸9.0）等等。 （0.01M pH6.0）、EDTA 抗原修复液（pH8.0 或，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育。 ，将脱蜡
一、酶消化修复法切片脱蜡，TBS20~30min后TBS
二、微波抗原修复法
微波盒中加切片架上，放，中档或10~15min，取出微波盒，自来，取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异，须自行调整。 
三、直接高压抗原修复法
取修复液于不锈钢高压锅中加热至    ，将组织切片，修复液然，盖上锅盖，待喷1.5~2.5min即可脱离热源，自，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。
四、隔不锈钢高压锅中加自来腾，将切片放，微波盒中加，待喷4~8 min即可，自然，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。